親和層析是一種通過(guò)分子間的特異性識(shí)別和相互作用來(lái)分離純化物質(zhì)的層析方法。如酶與底物、抗原和抗體之間專一的相互作用等。將其一作為配基固定在填料上,就可以從初始樣品中吸附相應(yīng)的生物分子,然后通過(guò)合適的洗脫將其解離達(dá)到純化的目的。
離子交換層析是基于蛋白質(zhì)和離子交換層析介質(zhì)之間的電荷相互作用進(jìn)行分離。離子交換層析介質(zhì)通常帶有正或負(fù)電荷,吸附帶有相反電荷的蛋白質(zhì)。通過(guò)調(diào)整緩沖液的離子濃度或pH值,可以改變蛋白質(zhì)與介質(zhì)的結(jié)合強(qiáng)度,實(shí)現(xiàn)不同蛋白質(zhì)的分離。
疏水層析(HIC)是一種液相吸附層析,它是依據(jù)生物分子之間的疏水性的差別來(lái)進(jìn)行分離的。固定相由非極性物質(zhì)(如烴類、苯基等)組成的層析,非極性分子間或分子的非極性基團(tuán)間具有吸引力,不同分子的非極性基團(tuán)與固定相的非極性物質(zhì)結(jié)合的強(qiáng)弱不同,從而達(dá)到分離。該方法多用于蛋白質(zhì)的分析和分離。
凝膠過(guò)濾層析是依據(jù)生物分子體積大小差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的層析方法,也稱為分子篩層析及體積排阻層析。凝膠過(guò)濾介質(zhì)是一類具有不同孔徑大小分布的三維網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)球形介質(zhì),不同體積大小的生物分子在流經(jīng)凝膠過(guò)濾層析介質(zhì)時(shí),因介質(zhì)孔徑大小與分布不同,使不同大小的生物分子產(chǎn)生不同的柱程與保留時(shí)間,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)不同大小生物分子的分離。